Материалы и методы исследования

Процедура исследования:

· в полученную бактериальную суспензию внесили по 0,2 мл суспензии в верхнюю 1/3 косяка во все пробирки с питательной средой, приготовленной для определения устойчивости культуры данного номера, тщательно сверяли номер культуры засеваемой суспензии с номерами, написанными на пробирках. Во избежание ошибок все пробирки, подготовленные для засева одной культуры, расставляли в одном ряду штатива;

· по завершении засева всех суспензий засеянные пробирки перемещали в горизонтальные штативы-диваны и помещали в термостат при температуре 37°С; при этом поверхность косяка питательной среды находилась в горизонтальной плоскости, а наклон штатива исключал смачивание пробки материалом засева;

· по истечении 3 суток инкубации засеянные пробирки переводили в вертикальное положение;

· инкубирование проводили в течение 21 дня при обязательном еженедельном просмотре.

Оценка результатов

Результат определения лекарственной устойчивости учитывали на 21 день после посева. При скудном росте в контрольной пробирке все пробирки с препаратами оставляли еще на 1,5недели в термостате до получения выраженного роста в контроле, после чего выдавалиокончательный ответ. Культуру считали чувствительной к данной концентрации препарата, если в пробирке со средой, содержащей препарат, выросло менее 20 колоний при обильном росте в контрольной пробирке. Культура считалась устойчивой к той концентрации препарата, которая содержится в данной пробирке, если в пробирке со средой выросло более 20 колоний при обильном росте в контроле.

Исследования проводились по методу абсолютных концентраций на среде Левенштейн-Йенсена со следующими концентрациями препаратов 1 ряда: стрептомицин (Str) - 4 µг/мл, изониазид (Inh) - 0,2 µг/мл, рифампицин (Rif) - 40 µг/мл, этамбутол (Emb) - 2 µг/мл. Одновременно те же штаммы тестировались на агаремиддлбрук7Н10. Концентрации препаратов в агареМиддлбрук 7Н10 следующие: Str-2,0µг/мл; Inh-0,2µг/мл; Rif-1,0µг/мл; Emb-5,0µг/мл.

Концентрации для пробирок MGIT: Str -0,8 мкг/мл, Inh 0,1 мкг/мл, Rif 1,0 мкг/мл, Emb 3,5 мкг/мл. Учет результатов производили в течение 8-ми недель от момента посева. Бактериальная суспензия, приготовленная как описано выше засевали по 0.5 мл в пробирки с ростовой добавкой и разведениями антитуберкулезных препаратов по инструкции производителя и инкубировали в термостате в герметично закрытых полиэтиленовых пакетах. Для определения лекарственной устойчивости требуется от 3-х до 14-ти дней. Во всех случаях исследования лекарственной резистентности положительный результат анализа обязательно подтверждался при контрольном микроскопическом исследовании на наличие кислотоустойчивых бактерий и отсутствие роста загрязняющей микрофлоры.