Методы выявления и подтверждения диагноза туберкулеза

Опыт фтизиатров всего мира доказал, что «золотым стандартом» диагностики туберкулеза является сочетание культурального и микроскопического методов исследования, которые остаются актуальными, несмотря на появление большого числа альтернативных методов (Браженко, 2006).

Метод посева или культуральный метод выявления M.tuberculosis

Достоверно подтвердить туберкулезную природу заболевания и изучить биологические свойства выделенного можно только при выделении культуры M.tuberculosis. Культуральное исследование следует проводить во всех случаях подозрения на туберкулез, используя не менее двух разных по составу питательные среды (Левенштейна - Йенсена и Финна-П). Жидкие питательные среды используют для нейтрализации рН посевного материала, при изучении лекарственной чувствительности и т.д. (чаще используется среда Школьниковой).

При исследовании на плотных питательных средах ответ о выделении кислотоустойчивых микобактерий дают при появлении характерных колоний не ранее 3-4 недель инкубации и только после подтверждения кислотоустойчивости выделенного микроорганизма при микроскопииокрашенного по Цилю-Нильсен мазка из выросших колоний. Величина КОЕ (число колониеобразующих единиц) высчитывается как среднее из числа колоний, выросших на всех пробирках. Интенсивность роста обозначают следующим образом:

+ 1-20 КОЕ «скудное» бактериовыделение;

++ 21-100 КОЕ «умеренное» бактериовыделение;

+++ > 100 КОЕ «обильное» бактериовыделение.

Затем изучают биологические свойства выросшей культуры, ее идентифицируют и определяют принадлежность к комплексу M.tuberculosis, а также определяют чувствительность к противотуберкулезным препаратам.

В качестве методов, альтернативных классическому культуральному исследованию, возможно использование автоматизированных и полуавтоматизированных систем ускоренной культуральной диагностики: ВАСТЕС, MGIT (ручная и автоматическая), МВ/ВасТ. Все они используют жидкие питательные среды и различаются по способу индикации роста микобактерий (Голышевская и др., 2008).

Культуральная диагностика туберкулеза с помощью автоматизированной системы BACTEC

Система ВАСТЕС 460 - радиометрический метод быстрого определения роста МБТ путем регистрации уровня меченого СО2, образующегося в процессе утилизации субстрата с пальмитиновой кислотой, содержащей радиоактивный 14С. Для роста МБТ в данной системе используют флаконы с жидкой питательной средой, которая представляет собой обогащенную среду Middlebrook 7H9, содержащую радиоактивный14С. При размножении МБТ утилизируют 14С и выделяют 14СО2, в этом случае учет идет по нарастанию 14СО2(Мишин, 2009).

Система ВАСТЕС MGIT 960 - индикаторные пробирки MGIT( M. GrowthIndicatorTube ) с той же средой Middltbrook 7H9, содержат в придонной части флюоресцирующий индикатор ( трис-4,7-дифенил-1,0-фенантролин рутениум хлорид пентагидрат), «погашенный» высокими концентрациями О2. В процессе роста МБТ поглощают О2, что сопровождается усилением свечения индикатора, интенсивность которого оценивают при помощи трансиллюминатора.

Рост МБТ в системе ВАСТЕС регистрируют на 4-5-й день от момента посева мокроты.

Культуральный метод и систему ВАСТЕС применяют также для определения лекарственной устойчивости МБТ (Мишин, 2009).