Получение аптамеров к поликлональным аутоантителам, вырабатываемым организмом человека при рассеянном склерозе (результаты и обсуждение)

Рассеянный склероз (РС) - хроническое нейродегенеративное заболевание аутоиммунной природы, представляющее собой острую медико-социальную проблему. При рассеянном склерозе поражаются головной мозг, зрительные нервы, спинной мозг, что приводит к нарушению соответствующих функций организма. Данное заболевание характеризуется образованием хаотически рассеянных очагов демиелинизации, т.е. утраты миелина - белково-липидной мембраны, покрывающей нервное волокно. Около 30% всех белков миелина составляют три изоформы так называемого основного белка миедина (ОБМ), который является одним из основных аутоантигенов при РС. Ранее было показано, что в деградации ОБМ могут принимать участие каталитические антитела [28, 29, 163-167].

Целью данной работы являлось получение РНК-аптамеров, устойчивых в биологических средах, способных селективно и с высокой аффинностью связывать аутоантитела человека, больного рассеянным склерозом.

НК-Аптамеры - это одноцепочечные молекулы ДНК или РНК, способные селективно связывать свои молекулы-мишени. Аптамеры часто называют синтетическими антителами, но они превосходят их по многим параметрам: конформация аптамеров может изменяться при взаимодействии с молекулой-мишенью, что повышает их сродство к мишени; в отличие от антител аптамеры могут быть получены к любым молекулам-мишеням; по сравнению с антителами, аптамеры химически более стабильны, неиммуногенны и могут быть синтетически получены синтетически в чистом виде в препаративных количествах.

Как уже говорилось в обзоре литературы (п. 1.4.), РНК-аптамеры по сравнению с ДНК-аптамерами способны образовывать большее количество разнообразных вторичных структур. В свою очередь ДНК-аптамеры более стабильны в биологических средах. Деградация ДНК нуклеазами в сыворотке крови занимает минуты, РНК - секунды [66]. Для повышения стабильности РНК-аптамеров в биологических средах могут быть использованы различные модификации межнуклеозидной фосфатной группы и остатков рибозы [8, 66] (п. 1.5.). Как следует из обзора литературы, одной из наиболее часто применяемых при создании комбинаторных РНК-библиотек модификаций является замена пиримидиновых нуклеотидов их 2'-F-модифицированными аналогами. Такая модификация позволяет повысить устойчивость олигонуклеотидов к деградации нуклеазами, не изменяя их специфичности [77]. Поэтому в качестве исходной комбинаторной библиотеки для создания устойчивого в биологических средах РНК-аптамера, способного высокоспецифично связывать аутоантитела человека при РС, была выбрана 2'-F-пиримидинсодержащая РНК-библиотека.

В рамках данной дипломной работы предстояло решить следующие задачи:

- провести химико-ферментативный синтез 2'-F-модифицированной РНК-библиотеки;

создать и апробировать методику отбора аптамеров к поликлональным аутоантителам человека, больного рассеянным склерозом;

исследовать эффективность связывания обогащенной 2'-F-модифицированной РНК-библиотеки с поликлональными аутоантителами;

изучить влияние обогащенной 2'-F-модифицированной РНК-библиотеки на протеолитическую активность аутоантител;