Методика проведения эксперимента на биообъектах

Учитывая факт того, что проведённые на предыдущем этапе исследования показали, что основным механизмом разрушения костного матрикса при огнестрельном переломе является его остеопорозоподобная трансформация в зоне «молекулярного сотрясения», в основе которой лежит аморфизация кристаллов гидроксиапатита, что позволило теоретически обосновать возможность направленной химической коррекции данного патологического процесса, было принято решение о проведении второго этапа экспериментальных исследований с использованием лабораторных животных. Данный этап включал в себя нанесение огнестрельного перелома диафиза правой большеберцовой кости, первичную хирургическую обработку перелома и наложение аппарата внеочаговой внешней фиксации с последующим лечением 1 группы животных по стандартной схеме, а другой - с добавлением к общепринятому комплексному лечению стронция ранелата в дозе 1 гр. в сутки. Животных выводили из эксперимента на 14-е, 30-е и 60-е сутки лечения с забором костных образцов для оценки характера изменения тонкой структуры кости.

Эксперимент был выполнен на баранах-самцах породы «Советский меринос» массой 50-57 кг без признаков повреждений и заболеваний.

Всего в эксперименте было задействовано 12 животных (баранов). При этом контрольная группа, созданная для забора как интактных, так и образцов из области огнестрельного перелома в остром опыте, составила 2 животных.

Во время проведения эксперимента проводились общеклинические, макроскопические, рентгенологические, микробиологические исследования. После вывода животных из эксперимента полученные костные образцы были подвергнуты гистологическим, электронно-микроскопическим (сканирующая электронная и атомно-силовая микроскопия) исследованиям, рентген-структурному анализу, микротвердометрии и денситометрии.

Проведение эксперимента осуществлялось в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», введённых в действие Приказом Министра Здравоохранения СССР № 755 от 12.08.1977 г., «Правилами проведения научных исследований с использованием экспериментальных животных» (Распоряжение Президиума АН СССР № 120002496 от 02.04.1980 г.), «Правилами проведения качественных клинических испытаний в Российской Федерации», утверждённых МЗ РФ 29.12.98 г., «Рекомендациями комитетам по этике, проводящим экспертизу биомедицинских исследований» (ВОЗ, 2000 г.) и «Директивами Европейского сообщества» (86-609 ЕЕС).

Перед нанесением огнестрельной травмы животных вводили в наркоз путём внутримышечного введения раствора Золетил 100 в дозе 10 мг/кг, что обеспечивало эффект около 2 часов. Глубина наркоза контролировалась по выраженности роговичных рефлексов и тонусу скелетных мышц.

После достижения необходимой глубины наркоза и внешнего осмотра животные закреплялись в специально сконструированном станке в физиологическом положении на стрелковой трассе. Крепление животных осуществлялось матерчатыми лямками за рога и живот с опорой на 3 конечности и отведением задней левой конечности кзади.

Достигнутое положение позволяло передвигать животное вместе со станком, надёжно крепить датчики измерительной аппаратуры, обеспечивало оптимальный доступ для стрельбы и оказания неотложных мероприятий медицинской помощи, а также не вызывало у животного выраженных патологических изменений со стороны сердечнососудистой и дыхательной систем.